2 血清蛋白电泳 _生活经验

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血清蛋白电泳的检查过程及注意事项
1、检查过程
将缓冲液加入电泳槽内,调节两侧槽内的缓冲液,使其处于同一平面。
醋酸纤维素薄膜的准备:取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线,做点样标记。编号,并标明正、负极后,将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡,待充分浸透后(一般为20min)取出,夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
【2 血清蛋白电泳】将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样,样品应与薄膜的边缘保持一定的距离,以免电泳图谱中的蛋白区带变形,待血清渗入薄膜后,反转薄膜,使光面朝上,平直地贴于电泳槽支架上,用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通,稍待片刻。
接通电源,注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极,切勿接错。电压90～150v,电流0.4～0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压,电流可能不同,应灵活掌握),夏季通电45min,冬季通电时间稍长,约为60min,电泳区带展开约25～35mm即可。
染色:通电完毕,取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中,染色5～10min(以白蛋白区带染透为止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景无色为止。
定量:
比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度,然后计算出各管的含量(同时做空白管对照) 。
丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠,加入量同上法。10min后,白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氢氧化钠,使色泽加深,必要时离心,取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照),然后计算各自的含量。
光密度计扫描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果),将薄膜浸入透明液中2～3min,然后取出,以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡),将此玻片竖立片刻,除去多余透明液后,置于恒温90℃至100℃的烘箱内,烘烤10～15min,取出冷却至室温,用此法透明的各蛋白区带鲜明,薄膜平整,可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明,应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易发生皱折) 。B.扫描定量:将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内,进行扫描分析。
2、注意事项
空腹12小时,抽取静脉血化验,标本一定要新鲜血液。化验前要告知医生近期所服用的药物以及近期的生理改变。
血清蛋白电泳的相关疾病和症状
1、相关疾病
抗胰蛋白酶缺乏症,单克隆丙种球蛋白病伴周围神经病,急性间质性肺炎,系统性红斑狼疮所致脊髓病,慢性淋巴细胞性甲状腺炎,黄瘤,类风湿性关节炎,肾病综合征,肝硬化,大动脉炎
2、相关症状
蜘蛛蛊,烟酸缺乏,腹胀,尿失禁,遗尿,脊柱和四肢畸形,关节疼痛,黄疸,腹部肿块,腹痛
血清蛋白电泳的不适宜人群和不良反应
1、不适宜人群
无。
2、不良反应
无。

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