抗精子抗体怎么检查啊 _精子

抗精子抗体是指男性或者女性，对男性精液有抵抗作用，使精子无法正常和卵子结合，导致不孕不育的发生。抗精子抗体是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，其确切原因尚未完全明了。那么，抗精子抗体怎么检查?。?
1、酶联免疫吸附试验
　?。?）精子抗原制备：筛选收集精液常规检查正常的精液，用生理盐水反复离心洗涤，尽可能除去精浆，经超声波超声粉碎，10～ 15min 高速离心，吸上清，测定上清液蛋白浓度，将蛋白浓度稀释为 3.5～ 5.0μg/mL，为精子抗原溶液。
　?。?）反应板包被抗原：将人精子抗原稀释成 3.5～ 5μg/mL，包被液加到聚氯乙烯微量测定板内，每孔 100μL，置 4℃ 冰箱过夜。
　?。?）封闭处理：次日早晨，倾去抗原溶液，用洗涤 PBS洗 3次，每次 5min，每次洗涤后都要将板在纸上拍干，再加入 1% 的聚乙烯醇溶液 200μL封闭，置室温 1h后同上法洗涤。
　?。?）加待测样品：样品用 PBS稀释 100倍，每孔加入 100μL ，同时加 As-Ab血清及正常处女血清作分别阳性和阴性对照，置 37℃ 温育 1h，同上法洗涤。
　?。?）加酶结合物：HRP-Protein A 以 1∶640稀释，每孔加入 100μL ，置室温 1h ，同上洗涤。
　?。?）酶反应：加新鲜配制的 OPD 底物溶液，每孔加入 50μL，置室温暗处 10min，再加10% H2SO4终止液每孔 50μL 。
　?。?）结果判定：用酶标测定仪 490μm测其 OD 值，OD 值≥2.0时为阳性。
【抗精子抗体怎么检查啊】2、生物素-亲和素酶联免疫吸附试验
　?。?）在 40孔微量测定板中加入 2～ 6μg/mL人精子膜抗原包被液，每孔 100μL，4℃ 过夜。加 1% 聚乙烯醇封板 37℃ 、30min ，用洗液洗 3次。
　?。?）待检血清 1∶1000稀释（宫颈黏液 1∶100）每孔 100μL，37℃ 温育 60min，同上洗涤。
　?。?）1∶100生物素化羊抗人 IgG，IgA 或 IgM，每孔 100μL ， 37℃ 、60min，同上洗涤。
　?。?）1∶100酶标亲和素，每孔 100μL，22℃ 温育 30min ，同上洗涤。
　?。?）每孔加底物 100μL，37℃ 作用 5～ 10min，加 8mol/L H2SO450μL 终止反应。
　?。?）用酶标检测仪测 A490光密度（OD）值，为双份待测孔均值与双份阴性孔均值之差，血清取 OD 值 0.20（宫颈黏液取 0.10）作为 AsAb阳性的判断标准。

抗精子抗体怎么检查啊的详细内容就为您分享到这里，【精彩生活】jing111.com小编为您精选以下内容，希望对您有所帮助：